II.1- Prélèvement

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    Il n’existe pas de consensus international pour le prélèvement des échantillons dans les circuits de distributions. Cependant certains points sont couramment admis par les scientifiques des différents pays.

    Il est nécessaire d’établir un protocole exact de prélèvement et de toujours le suivre afin de permettre la reproductibilité des analyses. De plus les sites de prélèvements doivent être choisis minutieusement (endroits représentatifs et points critiques). Cette étape permet aux résultats d’être les plus représentatifs possible de l’état du réseau mais aussi de l’exposition des personnes. Pour cela les prélèvements sont effectués sur des points d’usage couramment utilisés à un moment de la journée où les installations fonctionnent dans des conditions normales. En effet le moment de l’échantillonnage peut jouer un rôle : il est évident que la concentration en légionelles détectées ne sera pas la même si le prélèvement est effectué après une période de stagnation de l’eau que s’il est réalisé après une importante circulation de l’eau.

    Deux techniques d’échantillonnage sont utilisées suivant le type d’analyse désiré :

- Le prélèvement du premier jet permet d'analyser la qualité de l'eau au point d'usage.

- Le point d'usage est décontaminé par flambage puis une certaine quantité d'eau est tirée avant d'effectuer le prélèvement. cette méthode permet d'analyser la qualité de l'eau en amont du point d'usage.

    Le prélèvement est réalisé dans la majorité des cas dans des flacons stériles d’1 L en plastique de préférence pour éviter la casse du verre. Le volume prélevé permet une sensibilité d’analyse de 50 UFC.L-1 : si la quantité d’eau prélevée diminue, la sensibilité de l’analyse diminue également. Lorsque l’eau contient un biocide oxydant, c’est à dire quand elle a été traitée peu avant le prélèvement, il est nécessaire d’ajouter dans le flacon stérile du thiosulfate de potassium ou de sodium afin de neutraliser cet agent biocide à raison de 0.5 mL à 0.1 N.

    Tout prélèvement doit être accompagné d’une fiche de prélèvement : exemple p.30 du Guide des Bonnes Pratiques "Legionella et tours aéroréfrigérantes".

    Enfin l’échantillon doit être acheminé au laboratoire d’analyse dans les 24h et maintenu à une température comprise entre 6 et 18°C. S’il n’est pas possible de respecter cette condition, l’échantillon doit être conservé entre 4 et 6°C et analyser dans les 2 à 5 jours. 

    Pour récapituler, voici une liste du matériel nécessaire lors de prélèvements : 

- récipient stérile d’1 L.

- thermomètre.

- chalumeau pour le flambage.

- trousse d’analyse pour le dosage des désinfectants.

- enceinte réfrigérée isotherme (pour la conservation et le transport de l’échantillon).

- masque et gants de protection pour le manipulateur.

II. Méthodes d'analyse

II.2 Méthode normalisée

II.3 Cytométrie à balayage laser en phase solide

II.4 Technologie Genesystems

II.5 Comparaison des 3 méthodes